色譜柱的維護(hù)

1.如何進(jìn)行色譜柱的維護(hù)？

首先避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動不能過緩。

①建議檢測前樣品和流動相進(jìn)行過濾。

②建議每天做完樣品后及時(shí)進(jìn)行清洗。

③常規(guī)檢測：測試完后直接把色譜柱反向連接采用90%有機(jī)相沖洗45min， 后保存在純甲醇或純乙腈中。

④使用緩沖鹽條件：

a等度條件：使用緩沖鹽之前和之后都用過渡流動相以1ml/min流速沖洗45min。

b梯度條件：使用緩沖鹽之前與初始流動相組成相同的過渡流動相以1ml/min流速沖洗45min。

注意：

過渡流動相是指有機(jī)相和水相比例與分析流動相相同比例，只是不含有緩沖鹽。
c緩沖鹽沖洗干凈后，采用90%有機(jī)相反向沖洗60min， 后保存在純有機(jī)溶劑中。

注意：

如果使用緩沖液不能存留色譜柱中過夜。

2.網(wǎng)上對柱子是否可以反沖一直有爭論，那什么樣的柱子可以反沖，什么不可以。反沖后是正者用，還是反著用。具體到各型號柱子不僅是ODS柱，其他如正向柱、氨基柱、離子交換柱等 好都有解釋。

答:一般的正相反相柱應(yīng)該都能反沖，只有兩端篩板孔徑不對稱的柱子不能反沖，不過目前這樣的柱子已經(jīng)比較少見了。反沖是為了把柱頭的污染物沖洗掉，反沖后還是正著用比較好，以免柱子的兩頭都被污染。我們一直提倡的是:正向使用，反向沖洗。

3.液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么？

①篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。
②存在干擾峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動相或更換選擇性好的柱子。
③可能柱超載，減少進(jìn)樣量。

4.HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法是什么？

①樣品量不足，解決辦法為增加樣品量。
②樣品未從柱子中流出，可根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動相或柱子。
③樣品與檢測器不匹配，根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長或改換檢測器。
④檢測器衰減太多，調(diào)整衰減即可。
⑤檢測器時(shí)間常數(shù)太大，解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)。
⑥檢測器池窗污染，解決辦法為清洗池窗。
⑦檢測池中有氣泡，解決辦法為排氣。
⑧記錄儀測壓范圍不當(dāng)，調(diào)整電壓范圍即可。
⑨流動相流量不合適，調(diào)整流速即可。
⑩檢測器與記錄儀超出校正曲線，解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線。

5.做HPLC分析時(shí)，柱壓不穩(wěn)定，原因何在？如何解決？

①泵內(nèi)有空氣，解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣，對溶劑進(jìn)行脫氣處理。
②比例閥失效，更換比例閥即可。
③泵密封墊損壞，更換密封墊即可。
④溶劑中的氣泡，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時(shí)改變脫氣方法。
⑤系統(tǒng)檢漏，找出漏點(diǎn)，密封即可。
⑥梯度洗脫，這時(shí)壓力波動是正常的。

6.HPLC柱驗(yàn)收測試時(shí)柱壓過高，請問為什么？

柱壓過高是HPLC柱用戶 常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因：
①拆去保護(hù)預(yù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問題，若柱壓仍高，再檢查。
②把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查。
③將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子，（此時(shí)不要連接檢測器，以防固體顆粒進(jìn)入流動池）。這時(shí)，如果柱壓仍不下降，再檢查。只用于使用過的柱子。
④更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請與廠商聯(lián)系。一般情況下，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個(gè)在線過濾器便可避免柱壓過高的問題。

7.為何出現(xiàn)峰展寬？

①樣品體積過大：用流動相配樣，總的樣品體積小于 一峰的15%。
②在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展:進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散。
③數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢:設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn)。
④流動相粘度過高:增加柱溫，采用低粘度流動相。
⑤檢測池體積過大:用小體積池，卸下熱交換器。
⑥保留時(shí)間過長:等度洗脫時(shí)增加強(qiáng)溶劑含量，也可用梯度洗脫。
⑦柱外體積過大:將連接管徑和連接管長度降至 小。
⑧樣品過載:進(jìn)小濃度小體積樣品。

8.流動相出現(xiàn)氣泡的原因有哪些？

①流動相溶液中往往因溶解有氧氣或空氣而形成氣泡。
②液路阻力比較大，吸液時(shí)出現(xiàn)了真空氣泡。
③系統(tǒng)開始工作時(shí)未能將流路中的空氣排除干凈。
④在注入樣品時(shí)混入了空氣。

9.常用的實(shí)驗(yàn)室脫氣方式還有哪些？

①加熱回流脫氣，脫氣效果 佳，但無法保持。

②氦脫氣，此方法脫氣效果佳，能除去百分之九十以上的空氣，但氦氣價(jià)格太貴，所以用的不多。

③真空脫氣，效果僅次于氦脫氣，但脫氣過程中容易造成樣品溶液揮發(fā)損失。

④超聲脫氣，只能脫去約百分之三十的空氣，但在實(shí)驗(yàn)室中 常用。目前還是盡量爭取用在線脫氣，方便且效果好。

10.氨基柱在進(jìn)酸性樣品時(shí)，很傷柱子，如使用一段時(shí)間后，柱效降低，峰形改變，如何恢復(fù)？

答：用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動相洗去多余氨)，之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時(shí)建議在流動相中略微添加少許氨如0.1％。