蛋白激酶B免疫組化試劑盒

產(chǎn)品名稱：蛋白激酶B免疫組化試劑盒

保存條件：不使用時(shí)取試劑盒中一抗保存-20℃(避免反復(fù)凍融)，其他均保存 2-8 ℃

試劑盒特點(diǎn)：該試劑盒具有靈敏度高，特異性強(qiáng)、背景清晰、成本低廉等特點(diǎn)，是理想的免疫組化染色試劑盒。適用于冷凍切片、石蠟切片及固定的細(xì)胞涂片，可用于檢測(cè)細(xì)胞、組織內(nèi)的特異性抗原。

溫馨提示：本檢測(cè)試劑盒適用于人、大小鼠，狗等絕大多數(shù)組織，但對(duì)于內(nèi)源性生物素含量比較豐富的組織（如腎臟、肝臟等），應(yīng)選用非生物素檢測(cè)系統(tǒng)，或用avdin 封閉。

試劑盒所含試劑：

1、貨號(hào)：YS-0128R ，Rab a AKT，50ul（應(yīng)用：IHC-P及IHC-F=1:100-500 ）

2、貨號(hào)：SP-0023 ，3% H2O2去離子水（無色）6ml（內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑）

3、貨號(hào)：SP-0023-A，Blocking Solution（藍(lán)色）6ml（封閉用正常山羊血清工作液）

4、貨號(hào)：SP-0023-B Go Anti-Rb IgG/Bio（黃色）6ml（二抗工作液生物素標(biāo)記羊抗兔IgG）

5、貨號(hào)：SP-0023-C，Streptavidin/HRP （紅色）6ml（辣根酶標(biāo)記鏈酶卵白素工作液）

6、貨號(hào)：C02-04001，DAB顯色液 B液（20×） 20ml

7、貨號(hào)：C02-04002，DAB 顯色液 A液（20×） 1ml

8、貨號(hào)：C01-04001 ，抗體稀釋液 30ml

用戶自備試劑（用戶自行購(gòu)買，亦可咨詢我公司客服購(gòu)買）：

一、0.1M PBS (pH7.2-7.4)緩沖液：

PBS（phosphate buffered solution）即磷酸鹽緩沖液，能夠提供相對(duì)穩(wěn)定的離子環(huán)境和pH緩沖能力，是生物學(xué)中經(jīng)常使用的緩沖鹽溶液，用于分子克隆及細(xì)胞培養(yǎng)等，pH為7.2-7.4，與人體血液等滲，主要成分為磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、氯化鈉以。

二、檸檬酸鈉抗原修復(fù)液：

可以用于石蠟切片、冰凍切片等樣品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定后的抗原修復(fù)?？梢杂行コ╊惞潭ㄔ噭?dǎo)致的蛋白之間的交聯(lián)，充分暴露石蠟切片等樣品中的抗原表位，從而大大改善免疫染色效果。

抗原修復(fù)方法：

方法1：沸水浴修復(fù)，將盛有修復(fù)液和玻片的燒杯置于沸水浴環(huán)境，保持外部沸騰狀態(tài)15min，自然冷卻至室溫。

方法2：微波修復(fù)，將盛有修復(fù)液和玻片的燒杯置于微波爐中，高火5min，?；?min，中火5min，自然冷卻至室溫。

方法3：高壓修復(fù)，將盛有修復(fù)液和玻片的燒杯置于高壓鍋，上汽后修復(fù)2-5min，然后將高壓鍋置入涼水中，減壓至正常后取出玻片

抗原修復(fù)注意事項(xiàng)：

1）脫蠟水化的切片，應(yīng)避免因切片干燥，而至非特異性染色。

2）熱修復(fù)操作時(shí)務(wù)必謹(jǐn)慎，當(dāng)心燙傷。

3）熱修復(fù)時(shí)間過長(zhǎng)易導(dǎo)致脫片，請(qǐng)注意控制時(shí)間。

三、DAB（二氨基聯(lián)苯胺）染色液：

過氧化物酶將使底物發(fā)生反應(yīng)，于反應(yīng)部位產(chǎn)生棕色沉淀物。標(biāo)本顯色時(shí)間一般為室溫 5~20分鐘，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察顯色況，顯色充分后應(yīng)將標(biāo)本及時(shí)脫水封固。

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

一）一抗稀釋的準(zhǔn)備：

本試劑盒中一抗稀釋液適用于免疫組織化學(xué)與免疫印跡等實(shí)驗(yàn)一抗的稀釋，產(chǎn)品添加了抗體保護(hù)劑、穩(wěn)定劑等成分，有效增加了稀釋后一抗的穩(wěn)定性，減少抗體非特異性吸附。

使用說明：按照抗體推薦效價(jià)（或個(gè)人優(yōu)化條件），將適量抗體加入抗體稀釋液即可。例如，效價(jià)為1：100時(shí)，可將10ul抗體加入到1ml抗體稀釋液中，充分混勻后即可使用。抗體現(xiàn)用現(xiàn)稀釋，稀釋后的抗體2-8℃可以短期保存，但抗體的效價(jià)會(huì)隨時(shí)間而降低。。

二）DAB顯色液的制備實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：在1毫升顯色液B液（DAB 底物液）中，加入1滴（約50微升）顯色液A液（DAB濃縮液），混合均勻，即配成DAB工作液。此溶液必須現(xiàn)用現(xiàn)配，配好后避光保存，6小時(shí)內(nèi)使用，剩余的液體應(yīng)棄去。標(biāo)本顯色時(shí)間一般為室溫 5~20分鐘，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察顯色的情況，顯色充分后應(yīng)將標(biāo)本及時(shí)脫水封固。

實(shí)驗(yàn)步驟（建議方案）：

1、石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水

2、蒸餾水沖洗，pbs 浸泡5 分鐘（如需采用抗原修復(fù)，在此步驟后進(jìn)行）。

3、3%雙氧水（H2O2）去離子水（無色液體）孵育15-20 分鐘，以消除內(nèi)源性過氧物酶活性。

4、滴加試劑A（藍(lán)色液體）室溫孵育15-20 分鐘，傾去，勿洗。

5、滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗，37℃孵育2-3 小時(shí)或4℃過夜。

6、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。

7、滴加試劑B（黃色液體），室溫或37℃孵育15-20 分鐘。

8、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。

9、滴加試劑C（橙色液體），室溫或37℃孵育15-20 分鐘。

10、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。

11、顯色劑顯色（DAB 或AEC）

12、自來水充分沖洗。

13、如果需要，可進(jìn)行復(fù)染，脫水，透明。

14、選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?/span>