OperettaCLS 高內(nèi)涵篩選平臺(tái)：抗體結(jié)合力的高通量免洗檢測

篩選是抗體藥物研發(fā)流程的開端，從成千上萬個(gè)單克隆細(xì)胞系分泌的上清液中篩選得到特異性抗體一直是藥物初期研發(fā)的核心領(lǐng)域。對(duì)于如今全面提速的抗體藥物研發(fā)市場，快速、高效地完成篩選工作有著重要的意義。

ELISA（針對(duì)蛋白抗原）和流式細(xì)胞儀（針對(duì)細(xì)胞膜表面抗原）仍是被廣泛應(yīng)用的篩選方法，但是它們都有著各自的局限性。ELISA篩選方法針對(duì)的是表達(dá)純化后的蛋白抗原，構(gòu)象與在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)時(shí)有所不同，導(dǎo)致篩選得到的高親和力候選抗體可能為假陽性，而且ELISA方法需要繁瑣的洗板和孵育，極大地增加了工作量；流式細(xì)胞儀篩選方法針對(duì)的是細(xì)胞膜表面抗原，但是需要耗費(fèi)大量細(xì)胞，而且細(xì)胞通過胰酶消化的過程也會(huì)對(duì)表面抗原有一定影響。

我們平臺(tái)基于珀金埃爾默公司最新型的 Operetta CLS高內(nèi)涵分析儀建立的高通量抗體篩選平臺(tái)有效地解決了以上問題。由于配備了共聚焦模塊，該儀器能夠直接對(duì)含有高濃度熒光二抗的96, 384或1536孔板內(nèi)貼壁細(xì)胞進(jìn)行熒光成像而不受高背景熒光影響，從而實(shí)現(xiàn)了對(duì)細(xì)胞表面抗體結(jié)合熒光信號(hào)的高速自動(dòng)化免洗檢測（此方法已經(jīng)通過我們嚴(yán)格的內(nèi)部實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了反復(fù)驗(yàn)證）。相較于ELISA或流式技術(shù)，高內(nèi)涵分析技術(shù)可以顯著降低抗體藥篩選過程中的試劑耗材、人力及時(shí)間成本。

此篩選平臺(tái)的操作流程簡單且全程無需清洗步驟：1，選擇待檢測靶點(diǎn)的細(xì)胞孔板；2，加入待檢測抗體孵育；3，加入二抗孵育；4，通過 OperettaCLS 檢測分析結(jié)果。

圖1，Operetta CLS高內(nèi)涵篩選平臺(tái)操作流程示意圖。

針對(duì)Immuno-Oncology相關(guān)靶點(diǎn)，我們均構(gòu)建了其過表達(dá)穩(wěn)定細(xì)胞株，現(xiàn)可提供服務(wù)的靶點(diǎn)孔板如圖2中所示。

圖2，Immuno-Oncology相關(guān)靶點(diǎn)的過表達(dá)穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建。A，已完成的和正在構(gòu)建中的靶點(diǎn)；B，CHO-K1（PD-L1）單克隆的流式檢測結(jié)果；C，通過Operetta CLS高內(nèi)涵分析儀對(duì)過表達(dá)細(xì)胞系進(jìn)行單克隆追蹤驗(yàn)證。

選擇好心儀的靶點(diǎn)后，只需要將待測上清交給我們，您就可以得到如圖3中有圖有真相的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，檢測下限可達(dá)5 ng/ml。

圖3， Operetta高內(nèi)涵篩選平臺(tái)檢測Anti-PD-L1抗體結(jié)合能力。

目前該服務(wù)已全面對(duì)外開放，歡迎所內(nèi)外感興趣的老師咨詢。

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4月初珀金埃爾默與中科院蘇州納米所納米生化平臺(tái)共建了合作實(shí)驗(yàn)室。相關(guān)ppt課件可前往如下地址下載：