離心方法之等密度梯度離心法

　　等密度梯度離心也稱為平衡密度梯度離心。等密度梯度離心是根據(jù)樣品中各組分的浮力密度差不同進行分離。在離心立場中，溶液中顆粒浮力密度小則上浮，浮力密度 大則下沉，上浮和下沉的顆粒會一直延梯度液移動到與其浮力密度恰好相等的位置上，該位置也稱顆粒的等密度點，離心時樣品各組分顆粒將按其密度大小分別移至 等密度點形成區(qū)帶，形成的區(qū)帶不會因離心時間長而發(fā)生變化。離心后收集所需區(qū)帶顆粒即為純化組分。離心前后樣品的狀態(tài)如圖5-3所示。

圖3 等密度區(qū)帶離心

　　因此，在離心前，樣品可置于梯度液的任意位置，一般是均勻分布在梯度液中。等密度區(qū)帶離心法的離心效果取決于樣品顆粒的浮力密度差，密度差越大，分離效果越顯著，與樣品顆粒的大小與現(xiàn)狀無關(guān)。

　　速率區(qū)帶離心和等密度區(qū)帶離心都需預準備梯度液。速率區(qū)帶離心的梯度液密度必須小于待分離組分中最小顆粒的浮力密度。利用顆粒形狀和大小差異而形成的沉降速 率不同達到分離目的。等密度區(qū)帶離心是一種平衡離心方法，利用顆粒密度差進行分離，與顆粒形狀和大小無關(guān)，處理量比差速離心法大。

　　等密度梯度離心經(jīng)常使用的梯度液包括氯化銫(CsCI)、溴化鈉等，典型的應用包括質(zhì)粒DNA（或者其他DNA、RNA核酸片段）的大規(guī)模高純度純化，脂蛋白的分離純化等。

　　質(zhì)粒DNA的氯化銫等密度梯度離心分離純化流程如下：

　　脂蛋白溴化鈉等密度梯度離心分離純化流程如下：

　　1)人全血1000 g離心10分鐘去除各種血細胞，上清為血清。

　　2)血清加入NaBr密度梯度液（不連續(xù)梯度）的底部，往上依次鋪濃度變小的梯度液。

　　3)然后在水平轉(zhuǎn)頭中，260,000 g離心力14℃下離心24小時，各種密度的脂蛋白從管底浮向它們自己的等密度區(qū)形成了純的各種密度脂蛋白區(qū)。而離心管底部保留著各種血清蛋白。

　　4)用上排法從離心管中抽出格層液體，經(jīng)DU核酸蛋白分析儀測定，定位各種不同密度血清脂蛋白。