《肌動(dòng)蛋白抗體測(cè)定免疫印跡法》意見(jiàn)征求

作者： 2020年04月14日 來(lái)源：全球化工設(shè)備網(wǎng) 瀏覽量：
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為此，中國(guó)測(cè)試技術(shù)研究院、正能生物、中國(guó)測(cè)試技術(shù)研究院生物研究所、青島科技大學(xué)等單位在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)的主管下，起草編制了《肌動(dòng)蛋白抗體測(cè)定免疫印跡法》。日前，該標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)編制完成，如今正面向社會(huì)征
　　有研究表明，肌動(dòng)蛋白可以進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)如血液、腦脊液及其他生物體液，如淋巴液、尿液、支氣管肺泡灌洗液中，不僅可以作為細(xì)胞損傷的標(biāo)志物,而且可能有直接的致死效應(yīng)。而F-肌動(dòng)蛋白可作為一種自身抗原，參與自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展，疾病相關(guān)抗肌動(dòng)蛋白抗體也可作為多種疾病的預(yù)后生物標(biāo)志物，為疾病診斷提供可信賴的依據(jù)。
 
　　進(jìn)一步研究肌動(dòng)蛋白在細(xì)胞外的存在形式及其在生理與病理反應(yīng)過(guò)程中的作用，不僅僅對(duì)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)，更是對(duì)許多重大疾病的診斷、預(yù)防及治療有重要意義。為此，中國(guó)測(cè)試技術(shù)研究院、正能生物、中國(guó)測(cè)試技術(shù)研究院生物研究所、青島科技大學(xué)等單位在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)的主管下，起草編制了《肌動(dòng)蛋白抗體測(cè)定免疫印跡法》。日前，該標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)編制完成，如今正面向社會(huì)征求意見(jiàn)。意見(jiàn)征求時(shí)間截止至2020年6月8日。
 
　　閱讀標(biāo)準(zhǔn)征求意見(jiàn)稿后可知，《肌動(dòng)蛋白抗體測(cè)定免疫印跡法》引用了GB/T6682《分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和實(shí)驗(yàn)方法》，規(guī)定了基于免疫印跡法的肌動(dòng)蛋白抗體表現(xiàn)分子量測(cè)定、效價(jià)驗(yàn)證、物種反應(yīng)以及穩(wěn)定性試驗(yàn)。
 
　　據(jù)悉，免疫印跡法原理是SDS與蛋白質(zhì)分子結(jié)合形成帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物。在電場(chǎng)的作用下，蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物向帶有異向電荷的電極移動(dòng)。根據(jù)聚丙烯酸胺凝膠分子篩效應(yīng)，復(fù)合物遷移速度與其分子量成負(fù)相關(guān)。將電泳分離的組分轉(zhuǎn)移并固定在化學(xué)合成膜等固相載體后，以特定的免疫反應(yīng)以及顯色系統(tǒng)分析印跡。
 
　　免疫印跡法需要的儀器設(shè)備有電子天平、垂直凝膠系統(tǒng)、轉(zhuǎn)移系統(tǒng)、電泳儀、離心機(jī)、均質(zhì)器、硝酸纖維膜、旋渦振蕩器、掃描儀和離心管。該方法的步驟如下：稱取1mg蛋白粉末加入1mL蒸餾水中溶解，使母液濃度為1mg/mL；將長(zhǎng)滿CHO細(xì)胞的培養(yǎng)瓶放置在冰上，用吸液管吸出培養(yǎng)液，加入足夠的冷的PBS在培養(yǎng)瓶中充分洗滌細(xì)胞表面；向培養(yǎng)瓶中加入冷的NP-40裂解液，然后用細(xì)胞刮子沿著瓶壁開(kāi)始刮細(xì)胞；重復(fù)第一個(gè)步驟以盡可能多的收集到細(xì)胞裂解液到離心管中；取出少量細(xì)胞裂解液測(cè)定蛋白濃度分裝保存在-70℃；電泳至溴酚藍(lán)到達(dá)分離膠底部；最后對(duì)其進(jìn)行印跡、免疫反應(yīng)。
 
　　我國(guó)現(xiàn)行的法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)中，沒(méi)有關(guān)于肌動(dòng)蛋白抗體測(cè)定免疫印跡法的標(biāo)準(zhǔn)，而本標(biāo)準(zhǔn)填補(bǔ)了肌動(dòng)蛋白抗體測(cè)定免疫印跡法檢測(cè)指導(dǎo)文件、技術(shù)操作細(xì)節(jié)的缺失，相信本標(biāo)準(zhǔn)能對(duì)肌動(dòng)蛋白抗體測(cè)定免疫印跡法檢測(cè)提供更為準(zhǔn)確、快速、規(guī)范的法則以提高檢測(cè)工作效率和降低檢測(cè)成本。
 
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