乳果糖檢測不再是難題，安譜實驗助力復原乳鑒定

樣品

原奶

原奶*2         

原奶*5         

原奶*10     

100ppm標品

兩個平行樣

兩個平行樣

兩個平行樣

兩個平行樣

兩個平行樣

編號

A

B

C

D

E

F

G

H

I

J

A空白

B空白

C空白

D空白

E空白

F空白

G空白

H空白

I空白

J空白

添加溶液

添加體積數(shù)

A-J 樣品

A-J 空白

樣品前處理后的上清液

0.50 mL

0.50 mL

乙酸鈉緩沖液（0.2 M）

0.10 mL

0.10 mL

去離子水

-

0.05 mL

瓶1（β-半乳糖苷酶）

0.05 mL

-

漩渦混合，并于40℃水浴中反應1小時，然后分別加入以下溶液，每加一個溶液，要蓋上螺帽進行漩渦混合。

TEA緩沖液（1 M）/硫酸鎂（10 mM）

0.50 mL

0.50 mL

氫氧化鈉溶液（0.33 M）

0.05 mL

0.05 mL

辛醇

0.01 mL

0.01 mL

瓶2懸浮液（葡萄糖氧化酶和過氧化氫酶）

0.05 mL

0.05 mL

30%過氧化氫

0.02 mL

0.02 mL

加完后蓋上螺帽于40℃水浴中反應15min，15min后于13000rmp離心10min，取上清液作為酶測試反應。注意：加入過氧化氫后不管是樣品還是樣品空白會產(chǎn)生氣泡，無氣泡產(chǎn)生說明實驗可能失敗。

添加溶液

添加體積數(shù)

A-J 樣品

A-J 空白

樣品酶解實驗后的上清液

1.00mL

1.00 mL

瓶3緩沖液

0.05 mL

0.05 mL

瓶4稀釋液（NADP+/ATP)

0.05 mL

0.05 mL

將上述溶液分別加入一次性的比色皿中，每加一個溶液蓋上比色皿蓋子手動搖晃均勻，然后反應3min，在340nm處檢測紫外吸光度，讀數(shù)為A₁，然后加入以下溶液進一步反應。

瓶5懸浮液（HK/G-6-PDH)

0.02 mL

0.02 mL

瓶6懸浮液（6-PGDH)

0.02 mL

0.02 mL

每加一個溶液蓋上比色皿蓋子手動搖晃均勻，然后反應10min，在340nm處檢測紫外吸光度，讀數(shù)為A₂，然后加入以下溶液進一步反應。

瓶7懸浮液（PGI)

0.02 mL

0.02 mL

加入以上溶液手動搖晃均勻，然后反應15min，在340nm處檢測紫外吸光度，讀數(shù)為A₃。注意：在檢測紫外吸光度A₁-A₃過程中，吸光度的大小會在一定范圍內(nèi)波動，波動過大或者不穩(wěn)定請排查各個實驗步驟，找出問題。

樣品

原奶

原奶*2         

原奶*5         

原奶*10     

100ppm標品

兩個平行樣

兩個平行樣

兩個平行樣

兩個平行樣

兩個平行樣

編號

A

B

C

D

E

F

G

H

I

J

計算最終濃度（ppm）

474.6

472.2

484.8

487.4

484

499.7

493.7

500.9

97.3

101.6

平均值

473.4

486.1

491.8

497.3

99.5

結(jié)論

A3-A2＞1.5，需對樣品進行稀釋；檢測值偏低

樣品稀釋2倍，5倍，10倍后通過Megazyme Mega-CalcTM進行計算，換算為原奶含乳果糖濃度，相互比較，誤差都在2%以內(nèi)，符合檢測要求。

平行樣檢測的數(shù)值與標準樣品的濃度相符，平行樣差值低于1%。