FDA討論基于質(zhì)譜技術(shù)的臨床應(yīng)用相關(guān)問題

 質(zhì)譜技術(shù)是19世紀(jì)末發(fā)現(xiàn)的一項(xiàng)劃時(shí)代技術(shù)，它通過測(cè)定物質(zhì)的分子量而為探索物質(zhì)的結(jié)構(gòu)提供了豐富的信息。而將分離技術(shù)與質(zhì)譜技術(shù)結(jié)合則是分離科學(xué)的一項(xiàng)突破性進(jìn)步。比如采用質(zhì)譜法作為氣相色譜(GC)的檢測(cè)器早已成為一項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)化的GC技術(shù)，但由于GC-MS不能分離不穩(wěn)定和不揮發(fā)的物質(zhì)，所以又逐漸發(fā)展出了液相色譜(LC)與質(zhì)譜連用的技術(shù)。到現(xiàn)在，無論是GC-MS，CE-MS(毛細(xì)管電泳)，還是LC-MS都已經(jīng)成為了分析化學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)。　　　　與傳統(tǒng)的分析化學(xué)領(lǐng)域不同，能夠應(yīng)用于臨床檢測(cè)領(lǐng)域的技術(shù)不僅要能夠滿足對(duì)物質(zhì)檢測(cè)特異性的要求，還要能夠滿足臨床檢驗(yàn)對(duì)于準(zhǔn)確性、重復(fù)性和線性度等要求。因此，任何一項(xiàng)能夠被國家監(jiān)管機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)的臨床檢測(cè)，都不僅僅是一項(xiàng)技術(shù)的革新，而更是一整套具有完備技術(shù)說明、工作流程和數(shù)據(jù)規(guī)范的工作系統(tǒng)?！　　　≡谖覈?，截止到2016年4月30日，CFDA總共批準(zhǔn)了與質(zhì)譜技術(shù)相關(guān)的進(jìn)口器械12項(xiàng)，國產(chǎn)器械8項(xiàng)。這一數(shù)量與諸如生化、免疫、化學(xué)發(fā)光等技術(shù)的大量批件相比實(shí)在比例甚微，說明在這一方面在未來會(huì)有非常大的增長(zhǎng)空間?！　　　≡谀壳矮@批的質(zhì)譜技術(shù)相關(guān)批件中，主要分為兩大類。一類是針對(duì)于小分子代謝物的檢測(cè)，比如應(yīng)用于新生兒代謝病篩查的丙氨酸、甘氨酸、25-羥基維生素D，以及同型半胱氨酸等的LC-MS、LC-MS/MS方法;另一類是采用MALDI-TOF(基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間)質(zhì)譜技術(shù)對(duì)于大分子(蛋白質(zhì))進(jìn)行檢測(cè)的質(zhì)譜技術(shù)，這一技術(shù)目前主要應(yīng)用于對(duì)微生物的鑒定?！　　　‰S著技術(shù)的不斷發(fā)展，不僅僅是針對(duì)于基因水平的研究越來越深入，針對(duì)于蛋白的研究也正在不斷的與臨床檢測(cè)具有越來越多的結(jié)合。除了現(xiàn)有的ELISA，免疫和化學(xué)發(fā)光技術(shù)，基于質(zhì)譜的技術(shù)在不久的將來一定會(huì)在蛋白質(zhì)、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)領(lǐng)域成為對(duì)蛋白進(jìn)行定量和監(jiān)測(cè)的最重要技術(shù)，而將其應(yīng)用于臨床檢測(cè)領(lǐng)域也將是下一個(gè)十年的檢驗(yàn)領(lǐng)域的大事件。為此，美國FDA于5月初舉辦了一次大型的政府-高校-廠家的多方會(huì)談，旨在從監(jiān)管-學(xué)術(shù)-生產(chǎn)等多個(gè)角度對(duì)LC-MS技術(shù)在臨床應(yīng)用中的現(xiàn)狀、可能碰到的問題以及如何對(duì)其進(jìn)行監(jiān)管等進(jìn)行了深入討論。下文將對(duì)此會(huì)議內(nèi)容進(jìn)行簡(jiǎn)述，為國內(nèi)相關(guān)研究機(jī)構(gòu)、生產(chǎn)企業(yè)以及政府監(jiān)管機(jī)構(gòu)提供最新進(jìn)展。　　　　即使在美國，LC-MS在臨床檢測(cè)中的應(yīng)用也僅處于起始階段。根據(jù)華盛頓大學(xué)教授Andy Hoofnagle提供的數(shù)據(jù)，在全美7700家獲得CAP認(rèn)證的實(shí)驗(yàn)室中，采用LC-MS技術(shù)的實(shí)驗(yàn)室大約只有不超過200家，比例不超過總實(shí)驗(yàn)室數(shù)量的2.6%。具體開展項(xiàng)目可參見下表1?！　?/span>

表1  采用LC-MS技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)的CAP實(shí)驗(yàn)室數(shù)量一覽表　　　　隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步，目前美國能夠采用LC-MS進(jìn)行檢測(cè)的蛋白/多肽臨床項(xiàng)目有14項(xiàng)，如下表2所示。　　

 表2  美國采用LC-MS技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)的蛋白/多肽項(xiàng)目一覽表　　　　LC-MS技術(shù)是否能夠與其他技術(shù)一樣，在臨床應(yīng)用中得到認(rèn)可，我們可以從某一項(xiàng)具體的檢測(cè)項(xiàng)目中稍作了解。以25-羥基維生素D為例，可進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)的方法和儀器都有很多種，所以可以從CAP的能力驗(yàn)證測(cè)試結(jié)果對(duì)LC-MS的檢測(cè)能力進(jìn)行了解，如下表3所示?！　?/span>

表3  25-羥基維生素D檢測(cè)能力驗(yàn)證結(jié)果　　　　從以上結(jié)果可以看出，LC-MS技術(shù)可以滿足能力驗(yàn)證的要求，是可以應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域的?！　　　∽鳛槿蜃钕冗M(jìn)的藥物監(jiān)管單位，F(xiàn)DA在此次會(huì)談中也派出了多名官員，從產(chǎn)品分類、注冊(cè)流程、技術(shù)參數(shù)等方面對(duì)LC-MS的臨床注冊(cè)工作進(jìn)行了詳細(xì)的介紹?！　　　≡诿绹?，早在1976年的醫(yī)療器械修正案就要求所有醫(yī)療器械必須合法進(jìn)入市場(chǎng)，因此1976年之后的所有醫(yī)療器械必須全部經(jīng)過FDA審批，才能進(jìn)入市場(chǎng)。　　　　至于大家最耳熟能詳?shù)捏w外診斷試劑相關(guān)產(chǎn)品(In Vitro Diagnostics，IVD)，根據(jù)美國聯(lián)邦法規(guī)21 CFR 809.3條款，可理解為是醫(yī)療器械的一個(gè)亞類，其是旨在用于診斷疾病或其他不適的試劑，儀器和系統(tǒng)，包括對(duì)于健康狀態(tài)的判讀，從而用來治愈、緩解、治療或預(yù)防疾病或其后遺癥。FDA根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)，將醫(yī)療器械分為三類，第一類為低風(fēng)險(xiǎn)，一般性控制就可以;第二類為中度風(fēng)險(xiǎn)，一般性控制通常還不足夠，往往需要進(jìn)行特殊控制;第三類為高風(fēng)險(xiǎn)，可對(duì)患者或使用者造成過度的傷害或疾病風(fēng)險(xiǎn)，以及對(duì)生命維持系統(tǒng)和人類健康造成重大損傷。目前要通過FDA批準(zhǔn)才能進(jìn)入市場(chǎng)主要有三種方式，第一種是上市前通告，也就是常說的510(k)，另一種是重新審批De novo，還有一種是上市前申請(qǐng)PMA(Pre-Market Application)?！　　　?10(k)包括部分I類產(chǎn)品(絕大多數(shù)還可以豁免)以及大部分的II類產(chǎn)品(極少數(shù)能豁免)，F(xiàn)DA根據(jù)其是否與之前的上市產(chǎn)品具有“實(shí)質(zhì)性等同”來進(jìn)行許可，目前，進(jìn)行此類申請(qǐng)需要先找到一個(gè)與申請(qǐng)標(biāo)的類似的產(chǎn)品(包括計(jì)算參數(shù))并有類似的預(yù)期使用范圍(即，前置產(chǎn)品Predicate)。FDA需要90天來給出答復(fù)。最終的決定書概要會(huì)公布在上?！　　　e novo類別是針對(duì)目前市場(chǎng)上還沒有前置產(chǎn)品的低風(fēng)險(xiǎn)到中等風(fēng)險(xiǎn)設(shè)備。根據(jù)具體情況進(jìn)行I類或II類的劃分，需要120天給出答復(fù)，De novo產(chǎn)品會(huì)成為以后具有相同預(yù)期用途產(chǎn)品類型的前置產(chǎn)品。　　　　PMA類別是針對(duì)于III類產(chǎn)品的，其不需要前置產(chǎn)品，需要證明其安全性和有效性，可以要求在進(jìn)行批準(zhǔn)前征求顧問委員會(huì)的決定，其安全性和有效性數(shù)據(jù)(SSED)會(huì)在上公開，需要180天給出答復(fù)?！　　　腇DA的角度出發(fā)，其職能在于要確保醫(yī)療器械、包括IVD產(chǎn)品，能夠合理地安全且有效地實(shí)現(xiàn)其預(yù)期使用目的。所以，對(duì)其進(jìn)行分析性驗(yàn)證是實(shí)現(xiàn)注冊(cè)審批的第一步。具體到LC-MS相關(guān)設(shè)備及IVD產(chǎn)品時(shí)，則主要包括以下關(guān)鍵內(nèi)容：(1)需要明確闡述何種被檢物是通過IVD進(jìn)行度量或檢測(cè)的，(2)需要進(jìn)行IVD檢測(cè)的樣品或樣本類型，(3)所申報(bào)IVD產(chǎn)品的底層技術(shù)，(4)所實(shí)施檢測(cè)的類型(定量檢測(cè)、定型檢測(cè)、半定量檢測(cè)等)，(5)適用于所申報(bào)測(cè)試的患者人群，(6)檢測(cè)結(jié)果的臨床目的，包括所提供設(shè)備能夠檢測(cè)的疾病/不適(比如，可輔助于(某種疾病/不適)的診斷)，(7)所實(shí)施檢測(cè)的參數(shù)設(shè)置，以及(8)最有可能獲得檢測(cè)結(jié)果的參數(shù)設(shè)置?！　　　》止茚t(yī)療器械審批的具體部門CDRH(Center for Devices and Radiological Health)，及其下屬分支中最重要的兩個(gè)辦公室ODE(Office of Device Evaluation)和OIR(Office of In Vitro Diagnostics and Radiological Health)在本次會(huì)談中特別指出，建議各申報(bào)單位在進(jìn)行涉及基于蛋白和多肽的LC-MS相關(guān)產(chǎn)品申報(bào)之前，最好先提交一份預(yù)申報(bào)申請(qǐng)，從而能夠與FDA進(jìn)行關(guān)于充分交流，以免在開始審批程序之后再對(duì)相關(guān)申報(bào)方案進(jìn)行修改。這些建議的具體內(nèi)容，包括，但不限于：　　　　1.準(zhǔn)確度和重復(fù)性　　　　就LC-MS相關(guān)產(chǎn)品而言，因?yàn)槠渖婕暗墓ぷ髁鞒掏ǔ１容^復(fù)雜，所以必須特別加以重視。需要考慮到的步驟包括了從樣品收集直到最終的數(shù)據(jù)輸出和分析，以及其中的某些特殊環(huán)節(jié)。　　　　考慮到質(zhì)譜技術(shù)可以一次對(duì)多種物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，因此，從一次質(zhì)譜測(cè)量得到的針對(duì)于多個(gè)被檢物的分析結(jié)果，可以被用作多重分析或可將其組合成為一個(gè)可接受的結(jié)果。但是，如果是多重分析，則要求所有被檢物都需要在一個(gè)測(cè)試中被全部檢測(cè)出來，而且每一種被檢物都要被單獨(dú)進(jìn)行評(píng)價(jià)和報(bào)告。例如，來自于患者樣本中的一種或多種蛋白，即若干的不同被檢物，可作為單獨(dú)因素合并于某一算法中，從而提供一個(gè)最終的、可接受的結(jié)果，例如預(yù)測(cè)某種疾病風(fēng)險(xiǎn)的分?jǐn)?shù)。而FDA通常會(huì)需要申請(qǐng)人提供證據(jù)，說明每一種被檢物對(duì)于最終分?jǐn)?shù)的貢獻(xiàn)，以及每一種組分在各種濃度組合中對(duì)于最終分?jǐn)?shù)的貢獻(xiàn)?！　　　?.線形度和回收率　　　　對(duì)于測(cè)量多種被檢物L(fēng)C-MS相關(guān)產(chǎn)品而言，無論是單獨(dú)(通過多種不同的樣板，每次測(cè)量一個(gè))或者組合(以IVDMIA方式)進(jìn)行測(cè)量，申請(qǐng)人都需要對(duì)每一種被檢物(獨(dú)立于其它被檢物)進(jìn)行線形度和回收率的評(píng)估?！　　　?.樣本的結(jié)轉(zhuǎn)　　　　根據(jù)某項(xiàng)分析的工作流程不同，有可能存在前序樣本中含有新的樣本，而對(duì)申請(qǐng)人而言，則需要對(duì)所述工作流程中有可能產(chǎn)生結(jié)轉(zhuǎn)的每一步驟都進(jìn)行鑒定和評(píng)價(jià)。在FDA之前的受理過程中，的確接到過這樣的結(jié)轉(zhuǎn)研究，即在包括所述設(shè)備的一系列全部工作流程中，在陰性或弱陽性樣本中出現(xiàn)了強(qiáng)陽性的情況?！　　　?.檢測(cè)限/分析靈敏度：空白限、檢測(cè)限和定量限　　　　LC-MS相關(guān)產(chǎn)品依賴于質(zhì)譜儀對(duì)于峰值的檢測(cè)與定量，或液相色譜中隨洗脫時(shí)間對(duì)離子流的測(cè)量。這兩種測(cè)量都離不開對(duì)高于系統(tǒng)中化學(xué)與電子噪聲的峰的檢測(cè)。在實(shí)際情況中，由于缺乏可靠的空白樣本，以及LC-MS技術(shù)的較低背景噪聲，要想確定空白限(LoB，limit of blank)往往是很難實(shí)現(xiàn)的;然而，如果某些臨床檢測(cè)的判定點(diǎn)接近于一起的靈敏度極限時(shí)，LoB就顯得至關(guān)重要了。LC-MS產(chǎn)品的檢測(cè)限(LoD，limit of detection)是采用信噪比的低值計(jì)算出來的。在不同的設(shè)備中，信噪比往往是不一樣的?！　　　?.分析特異性與干擾　　　　對(duì)LC-MS產(chǎn)品而言，主要有兩類干擾物會(huì)影響對(duì)被檢物的測(cè)量與定量。一類是存在于樣本中的同重離子或近同重離子(isobaric or near isobaric ions)，此類離子能夠在質(zhì)譜儀中被同時(shí)檢測(cè)到，從　　　　而對(duì)正確離子的檢測(cè)和定量造成干擾。因此有必要對(duì)這些干擾物的存在與否進(jìn)行評(píng)估，從而闡明是否這些干擾物的存在會(huì)影響到所述設(shè)備的安全性和有效性，還需要考慮到在標(biāo)準(zhǔn)操作條件下質(zhì)譜儀的分子量分辨率?！　　　?.樣品制備　　　　對(duì)于LC-MS相關(guān)設(shè)備而言，其樣品制備、尤其是涉及到蛋白和多肽的樣品制備是非常復(fù)雜的，也是在相關(guān)分析檢測(cè)中產(chǎn)生不精確和不可重復(fù)性的主要原因。因此，對(duì)操作人員、儀器、地點(diǎn)等各種變量進(jìn)行控制的能力，都會(huì)對(duì)LC-MS產(chǎn)品的安全性和有效性提出挑戰(zhàn)?！　　　?.內(nèi)標(biāo)　　　　對(duì)那些需要進(jìn)行大量樣品制備的LC-MS相關(guān)產(chǎn)品而言，內(nèi)標(biāo)的加入可以在整個(gè)工作流程中對(duì)不同步驟進(jìn)行監(jiān)控，從而了解被檢物的鑒定和定量信息。一般而言，內(nèi)標(biāo)的加入時(shí)間在整個(gè)分析流程中越早越好。內(nèi)標(biāo)的加入還可以實(shí)現(xiàn)在不同樣本、校準(zhǔn)品和對(duì)照品中對(duì)被檢物值進(jìn)行規(guī)范化?！　　　?.校準(zhǔn)品和對(duì)照品　　　　校準(zhǔn)品是用來將設(shè)備的原始輸出值轉(zhuǎn)化成被檢物濃度的參考，這樣的濃度可用于形成具有臨床判斷價(jià)值的數(shù)據(jù)。除了已知濃度的被檢物之外，對(duì)照品通常需要含有固定數(shù)量的內(nèi)標(biāo)，從而能夠在校準(zhǔn)品和患者樣本之間提供相對(duì)定量。在本文中，對(duì)照品是指對(duì)整個(gè)體系表現(xiàn)進(jìn)行驗(yàn)證的材料，即陽性對(duì)照和陰性對(duì)照。這樣的對(duì)照品并非是用于LC-MS相關(guān)產(chǎn)品流程控制中的標(biāo)準(zhǔn)品或內(nèi)標(biāo)?！　　　?.對(duì)比方法　　　　通常，F(xiàn)DA都會(huì)以WHO和/或NIBSC的方法作為某一具體被檢物的“金標(biāo)準(zhǔn)”。標(biāo)準(zhǔn)參考方法也通常是指為了獲知目標(biāo)條件有無二采用的最易獲得的方法。很多時(shí)候，在針對(duì)同一種被檢物的時(shí)候，可以有很多種不同的檢測(cè)方法，當(dāng)某一方法具有與提交申請(qǐng)具有相同的預(yù)期使用目的時(shí)，通常被稱為前置方法(Predicate)?？紤]到LC-MS設(shè)備的輸出結(jié)果與大多數(shù)儀器，例如免疫分析的輸出結(jié)果不同，因此要想直接對(duì)兩種儀器進(jìn)行比較是很困難的。要解決這一難題，且目前還沒有金標(biāo)準(zhǔn)或者參考方法的情況下，F(xiàn)DA也可以考慮接受經(jīng)由與臨床“真實(shí)”(即，根據(jù)目前的各項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)某一患者狀態(tài)的臨床全面評(píng)估)的儀器性能進(jìn)行過對(duì)比和證實(shí)的申請(qǐng)?！　　　?0.蛋白/多肽的選擇　　　　除了少數(shù)不需要經(jīng)過蛋白裂解就能夠被輕易檢測(cè)到的小分子生物活性多肽之外，絕大多數(shù)的多肽都是作為完整蛋白的代表。申請(qǐng)人可自行選擇最適合于其申報(bào)檢測(cè)項(xiàng)目的多肽，當(dāng)然這些多肽的生物物理性質(zhì)會(huì)影響其檢測(cè)項(xiàng)目的表現(xiàn)，包括體內(nèi)或在工作流程中對(duì)于翻譯后修飾的敏感性，胰酶水解的速率和效率，多肽在樣本和工作流程中的穩(wěn)定性等等?！　　　?1.峰選擇　　　　峰的選擇與評(píng)價(jià)對(duì)LC-MS產(chǎn)品的表現(xiàn)而言至關(guān)重要。影響液相色譜洗脫峰分辨率和重復(fù)性的因素包括色譜柱的選擇，緩沖液，流速和溫度等等。FDA之前就曾要求過申請(qǐng)人提交相關(guān)數(shù)據(jù)，證明在臨床實(shí)驗(yàn)室可能碰到的各種操作條件下，色譜峰的分辨率和重復(fù)性可以滿足審批要求。即使目前缺乏某些內(nèi)標(biāo)，F(xiàn)DA也可要求申請(qǐng)人提供數(shù)據(jù)，確保正確的峰和離子可以被檢測(cè)和定量?！　　　?duì)挑選色譜峰的軟件進(jìn)行選擇和評(píng)價(jià)也十分關(guān)鍵，尤其是在那些被檢物接近于最低定量限的樣本中，申請(qǐng)人需要對(duì)選峰軟件的準(zhǔn)確性和重復(fù)性進(jìn)行評(píng)估，并理解其重要性。　　　　12.核心IVD組件　　　　對(duì)LC-MS相關(guān)的產(chǎn)品而言，有很多耗材和組件都是必須的，例如色譜柱，胰酶的來源和類型，免疫親和抗體，免疫耗竭柱等。根據(jù)FDA之前的經(jīng)驗(yàn)，對(duì)核心組件中的任意一種進(jìn)行更換，都會(huì)導(dǎo)致分析過程中某種成分的改變，甚至需要對(duì)整個(gè)分析過程進(jìn)行重新驗(yàn)證?！　　　∩陥?bào)文件需要參考的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)文件如下表4所示。　　

表4 FDA申報(bào)過程中的CLIA和CLSI指導(dǎo)性文件一覽表　　　　來自美國國家標(biāo)準(zhǔn)與技術(shù)研究院(NIST)的Mark Lowerthal也就在臨床質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)室中實(shí)施標(biāo)準(zhǔn)化等內(nèi)容進(jìn)行了討論。主要涉及三個(gè)核心問題，第一是需要建立一個(gè)參考檢測(cè)體系，第二是需要使用科學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)體系，第三是需要建立可追溯的數(shù)據(jù)鏈，如下圖1所示?！　?/span>

圖1. 從標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)到臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的可追溯數(shù)據(jù)鏈　　　　Mark博士也就蛋白/多肽標(biāo)準(zhǔn)品的制備與分析提供了很多有價(jià)值的參考數(shù)據(jù)，比如最適合于作為氨基酸分析標(biāo)準(zhǔn)品的氨基酸可選自，但不限于，丙氨酸、精氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸和纈氨酸等，以及如何采用LC-UV，即NMR方法進(jìn)行純度分析?！　　　±肔C-MS技術(shù)對(duì)蛋白/多肽進(jìn)行檢測(cè)，最大的難題是來自于對(duì)樣本的預(yù)處理，即對(duì)蛋白/多肽進(jìn)行消化、分離和提取的步驟。來自美國實(shí)驗(yàn)室集團(tuán)(LabCorp)的Christopher Shuford博士通過計(jì)算機(jī)分析與計(jì)算，提出了根據(jù)對(duì)蛋白序列進(jìn)行N-連接糖基化、O-連接糖基化、碘化、甲硫氨酸、半胱氨酸位點(diǎn)分析等方法，進(jìn)而能夠在胰酶水解之前對(duì)目的蛋白進(jìn)行更加詳細(xì)的分析，從而有針對(duì)性地進(jìn)行目的蛋白的富集，進(jìn)而提高最后的質(zhì)譜檢測(cè)靈敏度與特異性?！　　　o論是在LC層析的過程，還是MS檢測(cè)過程中，每一個(gè)峰的產(chǎn)生都是根據(jù)檢測(cè)器對(duì)光電信號(hào)的響應(yīng)而得到的，而當(dāng)樣本中的物質(zhì)較多時(shí)，相鄰的峰往往會(huì)出現(xiàn)疊加或者干擾的情況，這一直都是儀器分析中的難題。來自Indigo BioAutomation的科學(xué)家特別就這一問題提供了最新的專業(yè)建議。該公司在過去幾年中，已經(jīng)處理了超過10億張色譜圖，針對(duì)于LC-MS在臨床中的應(yīng)用，該公司建議首先要避免對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行修飾，從而能夠降低驗(yàn)證的風(fēng)險(xiǎn)，即提供穩(wěn)定的基線以及采集完整的峰;其次要避免對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行調(diào)整，從而能進(jìn)行校正，即能夠?qū)δ硞€(gè)模型進(jìn)行驗(yàn)證，并可在有效線性范圍之外進(jìn)行稀釋;第三對(duì)校正過程進(jìn)行設(shè)計(jì)，從而獲得最好的統(tǒng)計(jì)學(xué)效果，即如果所得曲線是線性的，則可采用隨機(jī)的、可重復(fù)的水平來測(cè)量變異，并據(jù)此來表征儀器的狀態(tài)，或者使用間隔的區(qū)間來測(cè)量非線性的情況。　　　　質(zhì)譜技術(shù)是目前比較先進(jìn)的測(cè)量技術(shù)，能夠提供相關(guān)儀器的廠家主要有賽默飛世爾(Thermofisher)、安捷倫(Agilent)、沃特世(Waters)、布魯克(Brucker)、愛博才思(Sciex)和島津(Shimadzu)公司。但每家制造商對(duì)于其設(shè)備都有不同的設(shè)計(jì)，這樣就導(dǎo)致在信號(hào)采集，數(shù)據(jù)格式、結(jié)果評(píng)估等各個(gè)環(huán)節(jié)都不盡相同，很難將其進(jìn)行比較，更不用說能夠進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化操作。為了解決這一難題，華盛頓大學(xué)的Jarrett Egertson教授帶領(lǐng)其團(tuán)隊(duì)與上述六家公司進(jìn)行了長(zhǎng)期的溝通、談判，最終與所有公司都達(dá)成了共識(shí)，并在NIH的資助下，經(jīng)過8年時(shí)間，開發(fā)出了世界上唯一一款能夠?qū)⒏鞣N不同質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)的軟件-skyline，使得不同類型質(zhì)譜之間的數(shù)據(jù)可以相互比對(duì)和驗(yàn)證，大大方便了LC-MS的使用者。該軟件現(xiàn)在已包括了400,000開發(fā)源代碼的峰，還有60,000峰在檢測(cè)過程中，全球已有超過7000個(gè)注冊(cè)用戶。　　　　當(dāng)然，我們也知道在LC-MS的臨床應(yīng)用過程中，也存在許多亟待解決的問題，比如，樣本中的內(nèi)源和外源干擾物。除了諸如血紅蛋白的內(nèi)源干擾物，來自于患者服用的藥物，采血管內(nèi)的化學(xué)成分，以及從干血片上洗脫下來的物質(zhì)等外源干擾物也都能產(chǎn)生峰，從而在分析和解讀過程中對(duì)目標(biāo)被檢物峰造成干擾。此外，還有一些其他的干擾因素，比如自然界中的同位素，C-13( 1 Da)，Cl-37( 2 Da)，在實(shí)際工作中是不容易區(qū)別開的;有些同(等)重分子，C19H28O2(m/z=288.21)和C18H24O3(m/z=288.17)，大多數(shù)四級(jí)桿質(zhì)譜儀也不能對(duì)他們進(jìn)行區(qū)分;還有一些多電荷的狀態(tài)，如CHARGESTATE 3(m/z=387.84)和PEPTIDC 2(m/z=387.67)等，也很難通過常規(guī)的LC-MS方法得以有效區(qū)分。　　　　而且，相對(duì)于現(xiàn)在自動(dòng)化程度較高的生化、免疫和化學(xué)發(fā)光等方法，LC-MS技術(shù)在很大程度上對(duì)操作人員能力的要求也比較高，因此在我國的開展還需要循序漸進(jìn)?！　　　〉珡募夹g(shù)的進(jìn)步來看，質(zhì)譜技術(shù)的優(yōu)勢(shì)就在于能夠準(zhǔn)確的對(duì)蛋白/多肽進(jìn)行檢測(cè)和定量，而蛋白/多肽相關(guān)生物標(biāo)志物必將成為未來的臨床檢測(cè)新增長(zhǎng)點(diǎn)，所以LC-MS技術(shù)將會(huì)很快得到長(zhǎng)足的發(fā)展，我們也將對(duì)這一領(lǐng)域進(jìn)行持續(xù)關(guān)注?！　　　【庉孅c(diǎn)評(píng)　　　　近年來，隨著質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展及普及，其在臨床診斷中的應(yīng)用也越來越多。但同國外相比，中國在此方面發(fā)展較晚。國家食品藥品監(jiān)督管理總局(CFDA)最早批準(zhǔn)質(zhì)譜技術(shù)應(yīng)用于臨床是在2008年。截至目前，CFDA批準(zhǔn)的可應(yīng)用于臨床的質(zhì)譜技術(shù)和方法共17個(gè)，其中進(jìn)口廠商申報(bào)的9個(gè)，國產(chǎn)廠商申報(bào)的8個(gè)。以下為17個(gè)獲得CFDA批準(zhǔn)應(yīng)用于臨床的質(zhì)譜技術(shù)和方法詳細(xì)情況?！　　?/span>