在植物細(xì)胞中,葉綠素鑲嵌在葉綠體的類囊體膜中,是植物進(jìn)行光合作用的重要物質(zhì)。高等植物中主要含葉綠素A和葉綠素B,在褐藻、硅藻類中含葉綠素A、C1、C2;紅藻中含葉綠素D等。
早在1818年,Berzelius就開始了對葉綠素方面的研究。1941年Mackinney直接以80%丙酮為溶劑用分光光度法定量測定葉綠素a和b,同時(shí)還可以測定其他葉綠素和其他衍生物。1952年Richard和Thompson首次將分光光度法用于海洋學(xué)的多色素的同時(shí)分析。1963年P(guān)arson和Strickland認(rèn)為Richard和Thompson的結(jié)果有許多矛盾之處,并對葉綠素和類胡蘿卜素的計(jì)算公式進(jìn)行了修訂。由于此法簡單方便、準(zhǔn)確度高、可同時(shí)測定多種色素、便于處理大量樣品等優(yōu)點(diǎn),至今分光光度發(fā)還被廣泛應(yīng)用。1966年,Lorenzen率先提出了利用熒光法連續(xù)測量活體葉綠素含量分方法,對于測定海水葉綠素含量奠定了基礎(chǔ),當(dāng)然還存在著不足,如設(shè)備體積龐大、測量準(zhǔn)確性低等缺點(diǎn)。隨著高效液相色譜在色譜分離方面的發(fā)展,使高效液相色譜在20世紀(jì)80年代得到快速發(fā)展,從此時(shí)起葉綠素就可以不受其降解產(chǎn)物影響進(jìn)行準(zhǔn)確的定量分析。
綜合幾類普遍的測定方法,分光光度法是測量葉綠素最廣泛的一種方法,但操作過程復(fù)雜,提取時(shí)間長。高效液相色譜法具有分析速度快,精確測定各種光合色素含量,但由于儀器昂貴,分析步驟繁多,一般不能用于野外大量樣品的快速分析。應(yīng)用熒光法測定法測定葉綠素分為實(shí)驗(yàn)室熒光法和現(xiàn)場熒光法。熒光法測定具有靈敏度度高,檢出限低等優(yōu)點(diǎn)。
同時(shí)隨著人們對水環(huán)境進(jìn)行更多的檢測工作,采用熒光法測定水體中浮游植物葉綠素的含量,進(jìn)而達(dá)到測量藻類含量目的,從而預(yù)測水體污染程度,這就要求儀器有更好的便攜性、更高的準(zhǔn)確性。目前代理的美國安諾實(shí)驗(yàn)室的手持式葉綠素測定儀,采用熒光光度檢測技術(shù),具有便攜,靈活,操作簡便,無需萃取等特點(diǎn),其ChloroTech121A這一型號可以檢測水中葉綠素含量,同時(shí)具有濁度修正功能,內(nèi)部還設(shè)有GPS定位功能,配備便攜檢測箱,非常適用于現(xiàn)場的應(yīng)急監(jiān)測。