多元化檢測(cè)技術(shù)助力液體活檢ctDNA臨床應(yīng)用

    傳統(tǒng)的組織活檢，因其局限性，如腫瘤的異質(zhì)性、腫瘤患者無(wú)法進(jìn)行手術(shù)、某些腫瘤解剖位置不便進(jìn)行穿刺及穿刺自身的臨床風(fēng)險(xiǎn)等，可能導(dǎo)致患者無(wú)法獲得針對(duì)性治療；液體活檢(Liquidbiopsy)作為組織活檢的補(bǔ)充，通過(guò)非侵入性取樣降低活檢危害，在動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)腫瘤進(jìn)展和治療反應(yīng)等領(lǐng)域獲得臨床認(rèn)可，已成為腫瘤精準(zhǔn)醫(yī)療領(lǐng)域炙手可熱的明星技術(shù)。上個(gè)月底美國(guó)醫(yī)療保險(xiǎn)機(jī)構(gòu)Palmetto宣布將體細(xì)胞變異ctDNA分析測(cè)試納入其保險(xiǎn)范圍，可見(jiàn)液體活檢（ctDNA檢測(cè)）的臨床價(jià)值已獲得醫(yī)保機(jī)構(gòu)的認(rèn)可，并有望在臨床推廣。
　　
　液體活檢的檢測(cè)對(duì)象主要有CTC、ctDNA、循環(huán)microRNA和Exsome（外泌體），其中，ctDNA可應(yīng)用于腫瘤的早期診斷、動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)腫瘤的發(fā)生發(fā)展及療效、耐藥檢測(cè)、復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估等，在腫瘤診治中前景廣闊，受到越來(lái)越多的關(guān)注。
　　
　ctDNA是由腫瘤細(xì)胞釋放到血漿中的單鏈或者雙鏈DNA，攜帶有與原發(fā)腫瘤組織相一致的分子遺傳學(xué)改變。是一種特征性的腫瘤生物標(biāo)記物，并且可以被定性、定量和追蹤。但由于ctDNA含量低（<1.0%總cfDNA），片段短（180-200bp），半衰期短（~2小時(shí)），故其檢測(cè)對(duì)痕量核酸檢測(cè)技術(shù)提出全新的挑戰(zhàn)。

　液體活檢能否真正落實(shí)到臨床應(yīng)用，有賴(lài)于檢測(cè)技術(shù)的臨床普及。目前具備極微量核酸基因突變檢測(cè)能力的技術(shù)主要有ARMS技術(shù)（包括Super-ARMS）、第二代測(cè)序（NGS）和數(shù)字PCR（ddPCR，包括BEAMing技術(shù)），這些技術(shù)也是近期液體活檢專(zhuān)家共識(shí)中推薦的檢測(cè)技術(shù)。
　　
　ARMS技術(shù)是目前歐盟及中國(guó)CFDA批準(zhǔn)用于臨床的血液檢測(cè)方法，更是血液EGFR突變檢測(cè)專(zhuān)家共識(shí)推薦的技術(shù)。ARMS技術(shù)具有簡(jiǎn)便快速，特異性好，技術(shù)普及度高等特點(diǎn)，非常適合醫(yī)院廣泛開(kāi)展。作為腫瘤液體活檢臨床上唯一獲得法規(guī)支持的檢測(cè)技術(shù)，EGFR突變血液檢測(cè)產(chǎn)品（采用ADx-ARMS法）已廣泛應(yīng)用于臨床診斷，讓越來(lái)越多的患者受益。同時(shí)，ARMS技術(shù)自身也在不斷升級(jí)改造，Super-ARMS是ARMS技術(shù)的升級(jí)版，敏感度進(jìn)一步提高。隨著相關(guān)檢測(cè)試劑盒的開(kāi)發(fā)和產(chǎn)業(yè)化，未來(lái)有望成為普及性的臨床血液檢測(cè)方法。
　　
　NGS技術(shù)可檢測(cè)未知突變且檢測(cè)基因數(shù)量不受限，在檢測(cè)靈敏度方面亦有潛力可以挖掘，在腫瘤耐藥突變的監(jiān)測(cè)與研究等領(lǐng)域有很大的應(yīng)用潛力。然而，NGS建庫(kù)技術(shù)復(fù)雜，常規(guī)建庫(kù)測(cè)序方法使得血漿中含量極低的腫瘤信號(hào)完全淹沒(méi)在背景噪聲中，建庫(kù)過(guò)程原始信息丟失嚴(yán)重或成為敏感度潛力發(fā)揮的限制因素。同時(shí)，由于NGS技術(shù)專(zhuān)業(yè)要求高、檢測(cè)流程及信息解讀標(biāo)準(zhǔn)化、檢測(cè)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、費(fèi)用過(guò)高等限制了其臨床應(yīng)用。因此，NGS技術(shù)要實(shí)現(xiàn)在液體活檢中的臨床應(yīng)用，還有許多問(wèn)題亟待解決。
　 數(shù)字PCR技術(shù)，具有極高的敏感性，可絕對(duì)定量；但該方法檢測(cè)通量較低，且不能檢測(cè)融合變異，目前應(yīng)用此技術(shù)進(jìn)行ctDNA檢測(cè)的試劑盒尚待開(kāi)發(fā)中。值得一提的是，作為檢測(cè)已知基因變異位點(diǎn)的檢測(cè)技術(shù)，數(shù)字PCR技術(shù)與Super-ARMS技術(shù)具有高度的檢測(cè)一致性，且檢測(cè)靈敏度相當(dāng)，從臨床普及性上來(lái)看，Super-ARMS更適合于臨床應(yīng)用推廣。
 　液體活檢還處于行業(yè)發(fā)展的早期，還有一些問(wèn)題亟待解決，如提高檢測(cè)技術(shù)的靈敏度和特異性、血液采集系統(tǒng)和分析步驟等的標(biāo)準(zhǔn)化等。液體活檢已獲得臨床醫(yī)生的廣泛認(rèn)可，新的技術(shù)、方法和應(yīng)用都在快速涌現(xiàn)。隨著未來(lái)越來(lái)越多ctDNA檢測(cè)技術(shù)的介入，檢測(cè)的終端價(jià)格有望降低，這將有利于液體活檢的臨床推廣，加速腫瘤精準(zhǔn)醫(yī)療的醫(yī)學(xué)革命進(jìn)程，惠及更多患者。